常用的冷冻技术有哪些?南阳不孕不育医院(南阳天伦医院)妇科医师指出,冷冻保存技术中的关键问题是如何提高细胞冻存的存活率。目前临床上常用的冷冻技术主要有以下几种:
1、程序化慢速冷冻法。将细胞或组织室温下在低浓度的冷冻保护剂溶液中预平衡,然后放置在终浓度的冷冻液中,使胞内渗透压增高,细胞内液冰点下降。在冷冻仪内于预设的程序下在室温到植冰点之间降温。
助孕技术中常采用的植冰温度是-8~-6℃。在诱导冰晶形成时,导管离开冷冻仪的距离宜短,操作动作必须快,以预防温度波动过大。植冰使溶液浓度进一步增高,细胞进一步脱水。植冰后,在适宜冷冻速率下.溶液中的水逐渐转变为冰晶,溶质的浓度越来越高,细胞内、外液渐渐变为极其黏稠的状态,温度降到-150℃,放入液氮罐内保存。
2、玻璃化冷冻。将高浓度冷冻保护剂在快速冷冻过程中能够由液态直接变为黏稠、非结构的玻璃态,而无任何冰晶形成的技术。2080年代开始发展,主要的优点是简化操作步骤.缩短冷冻处理时间,不需程序冷冻仪,预防消耗大量液氮.因而日益受到重视。
玻璃化冷冻的步骤一般是在高浓度的冷冻保护剂短时间平衡之后,使用少的液体体积、采用导热性优选的、管壁薄或无管壁的容器作为标本载体,直接投入液氮中,以达到以快的降温速度,实现溶液的玻璃化。
有两条途径:一是极其快速的冷冻速率,二是极其高浓度的溶质。高浓度冷冻液可能存在潜在毒性,故应选择低薄性、低浓度冷冻保护剂或两种冷冻保护剂联合应用。(推荐阅读:人卵母细胞体外培养技术)
3、胚胎冷冻技术。冷冻胚胎的选择对是否能取得良好的冷冻效果至关重要。2~8细胞期胚胎的冷冻标准为I~Ⅱ级的高质量胚胎,细胞碎片<20%。含4~8细胞的分裂球的胚胎主要用胚胎慢速程序冷冻快速解冻法。
胚囊的冷冻可采用玻璃化玲冻技术。多数学者认为在囊胚期实施冷冻有浪费胚胎之嫌,但可以淘汰生存能力不良的胚胎,终的结果是妊娠率的提高和多胎妊娠率的降低。
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